Nuklein kislotasynyň sintezi gaty fazaly sialik amid trigliserid usuly bilen amala aşyrylýar, şonuň bilen DNK-nyň 3 ′ ujy gaty fazaly substratda herekete getirilýär we gerekli DNK bölegi sintezlenýänçä 3 ′ 5 ′ ugurda nukleotidler goşulýar. .Bu DNK polimerazynyň ulanylmagy bilen DNK sintezinden tapawutlanýar.
Birinji bazanyň 3 ′ ujy sintez wagtynda CPG-de herekete getirilýär, indiki bazanyň 5′-OH di-p-tolyl tritil DMT bilen goralýar, bazadaky amin topary benzo kislotasy bilen goralýar we 3 ′ -OH soň amin fosfat birleşmesi bilen işjeňleşdirilýär.1 bazanyň 5 5′-OH 1 we indiki bazanyň 3′-OH fosfit trigliseridi emele getirýär, soňra fosfat trigliseridine ýod bilen okislenýär, 5′-OH ikinji bazadaky goragçy aýrylýar indiki bazany goşmak arkaly dikloroasetik kislotanyň DM sikllerini goşmak we sintezden soň 5′-OH goraýjy gowşak kislota bilen aýrylýar Bu bölek konsentrirlenen ammiak gidroksidi bilen gaty rezinden aýrylýar, goraýjy bazadan aýrylýar ýyladyş astynda konsentrirlenen ammiak gidroksidi bilen ammiak gidroksidi aýrylýar, bölek vakuum guradylýar we nuklein kislotasy suwuk hromatografiýa ýa-da PAGE bilen arassalanýar.
Oligo sinteziniň ädimleri
Aýyrmak
The5 sany DMT gorag topary TCA çözgüdi goşmak bilen aýrylýar.
Işjeňleşdirme
Aktiwatory oligonukleotid monomer bilen garyşdyryp, işjeň oligonukleotid monomer aralygyny emele getirýär.
Jübütlemek
5 terminaly gidroksil topary durnuksyz fosfit trigliserid baglanyşygyny emele getirmek üçin generatiw kondensasiýa reaksiýasynda işjeň oligonukleotid aralygy bilen reaksiýa berýär.
Tutmak
Gaplaýjy serişdäniň goşulmagy, kondensasiýa reaksiýasyna gatnaşmaýan artykmaç gidroksil toparlary bilen asetilasiýa gaplama reaksiýasyny ýerine ýetirýär.
Okislenme
Suwy öz içine alýan ýod ergininiň goşulmagy, durnuksyz fosfor kislotalary trigliserid baglanyşyklaryny emele getirmek üçin durnuksyz fosfit baglanyşyklary bilen täsir edýär.
Siýanoetil ýarylmagy
Sintezden soň nuklein kislotasy önümi, fosfat trigliserid baglanyşygyndan sianetil toparyny aýyrmak üçin DEA ergininiň goşulmagy bilen.
Arassalanan we gorag
Nuklein kislotasynyň bölekleri konsentrirlenen ammiak gidroksid erginini goşup, gaty faza göterijisinden aýrylýar we gorag toparlaryny bazalaryň wodorod baglanyşyklaryndan aýyrmak üçin gyzdyrylýar.
Iş wagty: Noýabr-21-2022